A hiena listrada é quase estritamente noturna, embora possa ocasionalmente estar ativa durante as primeiras e últimas horas do dia. São considerados solitários porque se alimentam sozinhos e raramente são vistos em grupos. Embora pareça que sua organização social muda entre diferentes populações. Em algumas áreas (como na Ásia Central) estão organizados em pequenos grupos familiares constituídos por um casal adulto (macho e fêmea) e seus descendentes, que podem ser de ninhadas diferentes. Adultos e filhos mais velhos colaboram trazendo comida para os irmãos mais novos. Por outro lado, na África Subsaariana é solitário, mas no condado de Laikipia (Quênia) podem formar grupos de até quatro adultos (uma fêmea com vários machos) que compartilham o mesmo espaço e podem ser encontrados descansando juntos durante o dia. As mulheres são intolerantes com outras mulheres e dominantes sobre os homens.

Normalmente usam cavernas ou outras fendas rochosas como tocas, embora também possam usar tocas de terra (escavadas pelas fêmeas ou tocas abandonadas de outras espécies). Os machos não costumam passar muito tempo em tocas, por isso o cuidado com os filhotes recai principalmente sobre as fêmeas. Os filhotes nascem com os olhos e ouvidos fechados, sendo mais imaturos que os filhotes de hiena-malhada. Começam a sair da toca após 2 semanas e a comer carne após 30 dias, embora a fêmea cuide deles e continue a amamentá-los por 1 ano.

Além de carniça, também se alimentam de dejetos humanos, por isso, em algumas aldeias africanas, deixam lixo do lado de fora durante a noite para as hienas se alimentarem. Não são as presas preferidas de nenhum predador, mas são submissos à hiena-malhada (maior que eles), permitindo-lhes roubar sua comida e podendo até ser deslocados do habitat.